世界复合医学2023年3期

恒温扩增荧光快速检测技术在结核病诊断中的应用价值分析

申杰 谢芳

湖南省衡阳市第三人民医院  湖南衡阳421000

摘要：目的 评价恒温扩增荧光检测技术在快速检测结核病中的应用价值,以期为临床上结核病的快速诊断提供帮助。方法 收集2021年4月至2022年8月期间在衡阳市第三人民医院结核科就诊的940例疑似肺结核患者标本，分别用抗酸染色法、恒温扩增荧光法和BACTEC MGIT960快速液体培养法进行检测。以临床诊断作为参考标准，分析比较评价抗酸染色法、恒温扩增荧光法和液体培养法的检测效能。结果 抗酸染色法、恒温扩增荧光法和液体培养法的阳性检出率分别为19.47%(183/940)，35.85%(337/940)和30.32%(285/940)；以临床诊断为参照标准，恒温扩增荧光法的灵敏度为56.35%，特异度为99.42%，与液体培养结果具有较高的符合率（Kappa值0.87）。结论 恒温扩增荧光法具有良好的灵敏度和特异度，检测耗时短，快速、简便，适用于基层医院的结核病快速诊断。

关键词：恒温扩增荧光法；抗酸染色法；结核分枝杆菌；液体培养

Efficiency analysis and application value of isothermal amplification fluorescence method for rapid detection of tuberculosis 

Abstract: Objective To evaluate the application value of isothermal amplification fluorescence method for rapid detection of tuberculosis, in order to provide help for the diagnosis of tuberculosis in clinic. Methods From April 2021 to August 2022, 940 patients with suspected pulmonary tuberculosis were collected from the tuberculosis department of the Third People's Hospital of Hengyang City. The samples were detected by acid-fast staining method, isothermal amplification fluorescence method and BACTEC MGIT960 liquid culture. Using clinical diagnosis as reference standard, the efficacy of acid-fast staining method, isothermal amplification fluorescence method and liquid culture were compared and evaluated. Results The positive rates of acid-fast staining method, isothermal amplification fluorescence method and liquid culture were 19.47%(183/940), 35.85%(337/940) and 30.32%(285/940), respectively. With clinical diagnosis as the reference standard, the sensitivity and specificity of isothermal amplification fluorescence method were 56.35% and 99.42%, showing a high coincidence rate with the results of liquid culture (Kappa value 0.87). Conclusion Isothermal amplification fluorescence method has good sensitivity and specificity, short detection time, rapid and simple, suitable for rapid diagnosis of tuberculosis in primary hospitals.

Key words: Isothermal amplification fluorescence method; Acid-fast staining; Tuberculosis; Liquid culture

结核病是严重危害人类健康的慢性传染病[1]。由于新冠疫情，给结核病的防控工作带来了不利的影响。结核病的早诊断、早发现、及时规范治疗是控制结核疫情的重要手段。目前，实验室常规的病原学检测手段包括痰涂片、痰培养等，但由于检测灵敏度低、检测结果具有滞后性，造成漏诊或者误诊的问题。因此，传统的治疗方法远不能满足现代结核病早期发现和治疗的需求[2]。目前，分子生物学技术日益成熟，各种分子检测方法已广泛应用于结核病的临床诊断，并已被证明对提高结核病患者的诊断具有重要意义。恒温扩增荧光法能够在63℃的温度下，针对结核分枝杆菌复合群保守的基因IS6110进行扩增，实时绘制荧光扩增曲线，能够快速报告检测结果[3-4]。本文旨在评估恒温扩增荧光法的敏感性和特异度，通过三种检测方法的对比，评价恒温扩增荧光法检测痰液样本中结核分枝杆菌的临床应用价值，以期为临床提供一种快速、准确的结核病诊断方法。

1材料和方法

1.1 一般材料

收集2021年4月至2022年8月我院确诊的598例结核病患者、342例非结核肺部疾病患者，其中男性647例，平均年龄（53±23）岁，女性293例，平均年龄（48±10）岁，所有患者均未接受抗结核治疗。本研究通过衡阳市第三人民医院伦理委员会审核批准。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：肺结核患者（菌阳）：将按照WS 196-2017 结核病分类[4]和 WS 288-2017 肺结核诊断[5]进行纳入；非结核肺部疾病患者：易与结核病混淆的肺炎、慢性支气管炎、支气管扩张、肺癌等疾病患者。排除标准：(1)临床诊断结论不明确者；(2)未同时进行三种方法检测者或者任一方法未获得有效检测结果者。

1.3 试剂与仪器

抗酸染色试剂购自珠海贝索生物技术有限公司；Deaou-308C 恒温核酸扩增荧光检测分析仪和结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒（恒温扩增荧光法）购自广州迪澳生物科技有限公司，BACTEC MGIT 960 全自动分枝杆菌培养检测仪其所配套的试剂购自美国BD公司。

1.4 检测方法

（1）标本采集：按照《结核病实验室检验规程》[6]要求，标本为患者从肺深部咳出的3份痰样本(即时痰、夜间痰、晨痰)留于痰杯中，留取的痰标本量不少于3.0ml。

（2）抗酸染色法：按照《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[7]中的标准操作程序执行，将患者留取的痰首先做直接涂片、干燥，抗酸染色后镜检。

（3）恒温扩增荧光法：按照广州迪澳生物科技有限公司生产的结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒说明书进行操作，仪器自动报告检测结果，出现扩增曲线为阳性，无扩增曲线为阴性。

（4）液体培养：BACTEC MGIT 960结核菌快速培养法按照BACTEC说明书进行。采用N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH法进行痰样本前处理，接种于MGIT培养管中。对仪器报阳的培养物经涂片抗酸染色确认后可报告结核菌快速培养阳性，培养42d仪器未报阳，报告液体培养阴性[7-9]。

1.5统计学处理

采用SPSS 26.0进行统计学分析，分析指标有阳性检出率、灵敏度、特异度、符合率等。利用卡方检验对不同检测方法的阳性检出率进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 三种方法对痰标本检测阳性率的比较

对940份痰样本的检测结果统计分析，恒温扩增荧光法、抗酸染色法和液体培养的检出率分别为35.85%(337/940)，19.47%(183/940)和30.32%(285/940)。以临床诊断为参照依据，恒温扩增荧光法、抗酸染色法和液体培养的灵敏度分别为56.35%(337/598)，30.60%(183/598)和47.66%(285/598)，特异度分别为99.42%(340/342)，95.32%(326/342)和100%(342/342)。迪澳恒温扩增荧光法的阳性率高于抗酸染色法和液体培养检测法，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 三种方法检测痰标本结果的比较

2.2 恒温扩增荧光法与抗酸染色法、液体培养检测效能的分析

以抗酸染色结果为参照标准，恒温扩增荧光法与抗酸染色法的符合率为81.7%，Kappa值为0.56。以液体培养结果为参照标准，恒温扩增荧光法与液体培养的符合率为94.26%，Kappa值为0.87，说明恒温扩增荧光法与液体培养法具有很高符合率，见表2。

表2  恒温扩增荧光法与抗酸染色法、液体培养检测结果一致性比较

3讨论

在本研究中，恒温扩增荧光法的阳性检出率为35.85%，高于抗酸染色法（19.47%）和液体培养法（30.32%），这略高于宋世森[10]的研究结论，可能是纳入的研究对象及样本数量有关。另外，三种检测方法的特异度均在95%以上，液体培养法可达100%。就检测灵敏度而言，恒温扩增荧光法的灵敏度为56.35%，高于另外两种检测方法。本研究中，恒温扩增荧光法与痰培养具有较高的符合率和一致性，说明恒温扩增荧光法与传统培养方法均具有较好的诊断效能。

综上所述，通过与各种检测技术比较，恒温扩增荧光法的阳性检出率优于抗酸染色法和液体培养法，操作方便，检测快速，具有较好的临床应用价值，并适用于基层医院的结核病诊断。

参考文献：

[1]WHO. Global tuberculosis report 2021［M］． Geneva: World Health Organization，2021．

[2]欧维正,秦万,王琼,王明栋,张娟,徐勇,张廷梅.恒温扩增实时荧光检测快速诊断结核性脑膜炎的临床价值[J].检验医学,2020,35(11):1169-1172.

[3]陈燕梅,彭柯皓,陈亮,等.恒温扩增荧光技术在结核病临床检测中的应用价值[J].现代医院,2022,22(9):4.

[4]结核病分类(WS196—2017)[J].新发传染病电子杂志,2018,3(03):191-192.

[5]肺结核诊断 WS 288—2017[J].中国感染控制杂志,2018,17(07):642-652.

[6]赵雁林,逄宇．结核病实验室检验规程．北京:人民卫生出版社，2015:5-10，39-44．

[7]赵雁林，姜广路．痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册．北京:中国协和医科大学出版社，2009:7-11．

[8]孙蕊,王志锐,穆成,赵慧,王春花,巨韩芳.Xpert Mtb/RIF、痰涂片和培养在疑似肺结核诊断中的对比研究[J].中国卫生检验杂志,2018,28(01):10-12.

[9]李静,吴哲渊,杨景卉,等.恒温扩增荧光检测法检测结核分枝杆菌复合群的应用价值[J].中国防痨杂志,2022,44(11):7.

[10]宋世森.恒温扩增荧光检测法检测痰标本结核分枝杆菌复合群核酸的应用分析[J].结核病与肺部健康杂志,2016(01):42-46.