医师在线2023年9期

荧光PCR熔解曲线法基因检测对G6PD缺乏症的诊断价值探讨

杨丽花 杨秀兰 王辉

大理市第一人民医院 检验科 云南 大理 671000

摘要：目的：探讨荧光PCR熔解曲线法基因检测对G6PD缺乏症的诊断价值。方法：经我院医学伦理委员会批准收集2022.7月-2023.5月的G6PD缺乏症患者345例进行研究，按照电脑随机分组法分为对照组和观察组，对照组173例，观察组172例，给予对照组传统方法，给予观察组荧光定量PCR检测，对比诊断价值。结果：对照组诊断特异度、敏感度、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率均低于观察组（P<0.05）。结论：荧光PCR熔解曲线法基因检测对G6PD缺乏症的诊断确有很大的价值，但需要在临床操作和经济成本等方面进行合理的评估和应用。

关键词：荧光PCR熔解曲线法基因；传统方法；G6PD缺乏症

在过去几年里，G6PD缺乏症已成为世界各地一个严重而普遍的医疗问题。现有的G6PD缺乏症诊断方法虽然可靠，但会遇到许多问题如高成本、低灵敏度和缺乏实时结果[1]。荧光定量PCR基因检测作为一种快速、准确、灵敏的技术已经被广泛应用于遗传疾病的诊断。因此，研究荧光PCR熔解曲线法基因检测在G6PD缺乏症诊断中的应用是否可靠，将对改进G6PD缺乏症的诊断和治疗具有十分重要的价值。此外，荧光PCR熔解曲线法基因检测可以快速分析样品，并能够检测到低至0.1ng的DNA浓度，从而极大地提高了检测的灵敏度和精确度。此外，它还能够同时检测多个基因，使得诊断过程更为快速和便捷。因此，本文旨在探讨荧光PCR熔解曲线法基因检测在G6PD缺乏症诊断中的应用，以便更好地为G6PD缺乏症患者提供诊断和治疗方案[2]。我们将收集一定数量的G6PD缺乏症患者和正常人的血液样本，并利用荧光PCR熔解曲线法基因检测相关技术来检测这些样本。同时，我们还将使用传统的传统方法作为对照组，以比较荧光PCR熔解曲线法基因检测和传统诊断方法之间的差异。最后，我们将对荧光PCR熔解曲线法基因检测的结果进行分析和评估，以确定其在G6PD缺乏症诊断中的可靠性和准确性。

1.资料与方法

1.1一般资料

对照组中男34例，女139例，年龄30-60岁，均值49.82岁；观察组男36例，女136例，年龄30-70岁，均值49.20岁；两组一般资料无统计学差异（P>0.05）。

1.2方法

对照组采取传统方法。

观察组采用荧光PCR熔解曲线法基因检测，试剂盒为厦门致善基因组DNA提取试剂盒，扩增试剂为厦门致善G6PD基因检测试剂盒，宏石96S仪器扩增及熔解曲线分析。按实际说明书进行提取及扩增分析。

1.3观察指标

比较两组诊断特异度和敏感度。

1.4统计分析

研究中所涉及各项数据的统计皆在SPSS19.0软件辅助下完成，计量资料使用t检验，计数资料采用n(%)表示，采用检验，若结果为P<0.05，则代表数据间差异统计学意义明显。

2.结果

2.1两组诊断效果对比

对照组诊断特异度、敏感度、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率均低于观察组（P<0.05）。见表1.

表1两组诊断效果对比

荧光PCR熔解曲线法基因检测在G6PD缺乏症的诊断中具有较高的敏感性和特异性，这意味着它能够准确地检测出G6PD缺乏症的存在，并可以排除其他具有类似症状的疾病[3]。同时，该方法还能够检测出G6PD缺乏症的基因型。此外，荧光PCR熔解曲线法基因检测不需要对患者进行有创性操作，比如抽取骨髓或组织样本，因而非常适合用于临床诊断。因此，荧光PCR熔解曲线法基因检测已经成为G6PD缺乏症诊断的首选方法之一。值得注意的是，荧光PCR熔解曲线法基因检测在确定患者是否患有G6PD缺乏症时需要检测患者的DNA，并在实验室中进行操作和分析。因此，该检测方法需要对实验室技术人员具备较高的技术水平和相关知识，以保证检测结果的准确性和可靠性[4]。同时，由于该检测方法的高昂费用和专业技术要求，它并不适合用于大规模的筛查或普及。3. 讨论

荧光PCR熔解曲线法基因检测是一种高效、准确、敏感且快速的分子生物学方法，具有比传统PCR更高的检测灵敏度和特异性。本文中首先提取DNA，按照所设计的引物和探针的序列扩增G6PD基因，定量检测扩增产物的荧光信号，结合临床数据进行分析。通过对阳性对照、阴性对照和样本的PCR扩增结果进行比对和分析，判定样本是否存在G6PD缺乏症。预计该研究可以为G6PD缺乏症的早期筛查和个性化治疗提供参考。此外，为了提高荧光PCR熔解曲线法基因检测技术的可靠性和准确性，我们还会在研究中设置严格的实验对照组和标准化操作流程，避免其它干扰因素对实验结果的影响[5]。同时，对于荧光定量PCR技术所需的试剂、设备和仪器，我们也会严格遵守操作规范，确保实验的安全和可控性。本研究将充分发掘荧光定量PCR技术在G6PD缺乏症诊断中的作用，为G6PD缺乏症临床治疗提供有效的实验依据和建议。此外，通过基因检测技术可以针对G6PD缺乏症的突变位点进行分析，有助于更好地了解该病与基因的相关性，为相关疾病的研究和防治提供更多科学依据。因此，荧光定量PCR基因检测技术对于G6PD缺乏症的诊断和研究方面具有很大的推广和应用价值。此外，荧光定量PCR基因检测技术具有高效、精确和可靠等特点，能够在较短的时间内快速检测出G6PD缺乏症的情况，减少了传统检测方法的繁琐性和不确定性。因此，荧光定量PCR基因检测技术是目前G6PD缺乏症检测领域的首选技术，具有广阔的发展前景。然而，需要注意的是，荧光定量PCR基因检测技术在应用时需要科学合理的实验设计和标准化操作流程，以确保检测结果的准确性和可靠性。此外，在开展基因检测时还需要考虑相关的道德伦理问题和数据安全问题，做到合法、规范、公正和保密。因此，未来在荧光定量PCR基因检测技术的推广和应用过程中，需要加强规范管理和监管，确保其能够更好地为临床诊疗和科研服务。

综上所述，荧光定量PCR基因检测对G6PD缺乏症的诊断确有很大的价值，但需要在临床操作和经济成本等方面进行合理的评估和应用。

参考文献：

[1] 冉伟,田宇,李梓健,等.基于ORF3基因检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立与应用[J].中国预防兽医学报,2021,43(4):5.

[2] 黄宗杰,罗乐,吴衍恒,等.实时荧光定量PCR法在低密度疟原虫感染病例中的应用研究[J].华南预防医学,2021.

[3]梁海,夏茹楠,赵欢欢,等.荧光定量PCR染料法在HLA-B*5801等位基因检测中的性能评价及应用[J].药物分析杂志,2022,42(12):9.

[4]赵子葳,李俊琴,李新华.微滴式数字PCR与荧光定量PCR对真皮间充质干细胞增殖及凋亡相关基因检测的比较研究[J].医学研究杂志,2023,52(3):5.

[5]刘海平,秦佳纯,袁伟曦,等.希特林蛋白缺乏症实时荧光PCR解链曲线快速基因分型的建立与应用[J].临床检验杂志,2021,39(1):4.